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石蜡切片的制作

2019-06-29 16:04:49 养殖种植技术书籍

石蜡切片的制作

目的 了解切片在显微镜观察中的作用,学会石蜡切片制作的方法。

实验前的思考 石蜡切片的特点是切下的片子薄,而且厚度一致,还能切出连续的片子,有些柔软材料不能徒手切片,用石蜡包埋后可以切得很好。

材料器具 动物或植物的组织器官;切片机,恒温箱,解剖针,解剖刀,毛笔,石蜡容器,烧杯,滴管,玻璃板,载玻片,盖玻片,染色缸,吸水纸,布条;石蜡,等级乙醇,蒸馏水,二甲苯,氯仿,苯,香柏油,中性树胶,固定液,染色剂,甘油蛋白。

步骤

1.取材 根据要求取材,材料尽可能采取新鲜的,把它切成所要求的大小。如果不需要大块的材料,尽可能切小,这样投入固定液里便可以很快地被固定。

2.固定 制作动、植物装片或切片,须先进行固定。新鲜或活体的材料浸入固定液处理后,细胞迅速被杀死,但它原来的细胞形状和结构不变,能按原样保持下来,这就是固定。

固定液种类很多。固定不同的动、植物组织采用不同的固定液(详见本书第839页)。

3.浸洗 固定了的材料,根据不同的固定液,分别用普通水、蒸馏水或70%乙醇浸洗,浸洗的目的在于洗去固定液。洗好的材料,可以浸入70%乙醇中长期保存。

4.脱水 乙醇是常用的脱水剂,用乙醇脱水的过程中,以低浓度逐渐过渡到高浓度乙醇(例如70%、80%、90%、95%无水乙醇),来除去材料块中的水分。脱水时间跟材料块的大小有关。一般每级乙醇中脱水的时间是6~24小时。

5.透明 常用的透明剂有二甲苯、氯仿、香柏油、冬青油等。透明剂的作用是置换乙醇,让材料透明,有利于石蜡向材料内部的渗透。例如用氯仿作透明剂用于植物材料的透明。透明的步骤,如先用1∶2氯仿无水乙醇混合液浸3~6小时,后用2∶1氯仿无水乙醇混合液浸3~6小时,最后浸在纯氯仿中3~6小时,就可以达到透明效果。这种分三步进行的透明方法也叫做三级透明。

6.透蜡 石蜡能溶于透明剂中,把已透明的材料块,投入熔化了的各杯石蜡中,可以使透明剂为蜡所代替,材料块内的一切空隙被蜡渗入而填满。透蜡时可用石蜡容器也可用4只小烧杯里面盛半杯刚熔化的石蜡,在烧杯上依次贴上1、2、3、4。第1杯、第2杯里盛软蜡,第3杯和第4杯里盛硬蜡(一般软蜡熔点为48~52℃,硬蜡熔点为56~58℃左右)。杯子置于恒温箱中,然后把透明的材料先浸入第1杯,2至数小时后,再取出相继投入第2杯、第3杯、第4杯,每杯中停放2至数小时。透蜡时间,以脱尽全部透明剂,并充分渗入石蜡为原则。每一材料块至少要经过4只蜡杯,逐渐除去透明剂,而被石蜡所取代。蜡杯内要保持清净,不能有灰尘或材料碎块。

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