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细胞中DNA和RNA的显示

2019-06-29 16:03:41 养殖种植技术书籍

细胞中DNA和RNA的显示

目的 学习用细胞化学的方法,显示细胞内的DNA和RNA;了解DNA和RNA在细胞内的分布部位。

实验前的思考 DNA和RNA是细胞的重要化学成分,肉眼无法看到它们的存在和分布规律。通过细胞化学的方法,利用甲基绿与DNA亲和力强,结合后呈蓝色,吡啰红与RNA亲和力强,结合后呈红色的特性,可以把细胞中的DNA和RNA分布的部位清楚地显示出来。此外,还可以用其他方法显示DNA等物质。

方法一 甲基绿—吡啰红法

材料器具 蟾蜍;蛙板,蛙钉,解剖剪,注射器,小烧杯,细滴管,镊子,载玻片,显微镜,三角铁架,酒精灯,温度计,火柴,吸水纸,石棉网;水解液(1N盐酸),染色剂甲基绿—吡啰红。

步骤

1.取蟾蜍心脏血 用解剖针捣毁活蟾蜍的脑和脊髓,待四肢瘫痪,钉在蛙板上,剖开腹部,剪断胸骨(注意不要碰破大血管)。暴露心脏,仔细地剪开心包膜,露出肥厚的心室,左手轻按心房上部,右手把注射器针头刺入心室,针头略向上抬并向前伸,抽取心脏内的血液。

2.制血涂片 把抽出的心脏血,快速地注一小滴在清洁的载玻片的一端上,再另取一片载玻片,以一侧紧贴血滴,呈45°角,均匀地向载玻片另一端推去(见图)。把血滴推成极薄的一层血膜,放在桌上晾干。

3.水解 待血涂片完全干燥后才能水解。一般晴天2~3分钟就干了。晾干血涂片的同时,取一只小烧杯,注入60毫升左右水解液,以能浸没载玻片上的血膜为限,放在三角铁架的石棉网上,用酒精灯加热(见图)。以温度计测量,待水解液温度达28℃时移去酒精灯,水解液继续升至30℃。然后把已干的血涂片,正面向上,放入水解液中浸没。以30℃的温度水解10分钟(温度用酒精灯来调节,温差控制在±1℃左右)。

4.冲洗 用镊子取出血涂片,用清水从载玻片的一端冲洗,把载玻片微微倾斜,使水流慢慢地流过血膜(见图)。冲洗数次,洗净水解液,使水解停止。

5.染色 用吸水纸吸去血膜周围和载玻片反面的水分,绝不能碰到血膜。血涂片正面朝上,放入盛有染色剂的小烧杯中,染色剂的量以浸没血膜为限,在30℃温度中染色10分钟。

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