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叶绿体色素的提取和分离

2019-06-29 16:01:44 养殖种植技术书籍

叶绿体色素的提取和分离

目的 了解绿叶光合色素的种类、颜色和特点;学会简易的纸层析方法。

实验前的思考 光合作用是在叶绿体内进行的。高等植物叶绿体内含有叶绿素等多种色素,不同的色素吸收的光谱不同,用纸层析的方法能快速地分离出各种色素。

材料器具 新鲜菠菜(其他绿叶);(30×200毫米)带塞大试管,量筒,小三角烧瓶,托盘天平,铁架台,漏斗,剪刀,研钵,角匙,毛细吸管,大头针,定性滤纸,白色粉笔,脱脂棉花;95%乙醇,碳酸钙,石英砂,丙酮,60°~90°的石油醚,苯。

方法一 纸层析法分离色素

步骤

1.制取叶绿素提取液 称取5克去柄和粗叶脉的菠菜叶,剪碎放入研钵中,加入少量石英砂和碳酸钙(防止叶绿素破坏),再注入3~5毫升丙酮,研磨。取一小团脱脂棉花,轻轻塞在漏斗的颈口处,把漏斗放在小三角烧瓶上。把研钵中绿色叶泥倒入漏斗过滤(见图)。然后盖紧瓶口,避光保存。

2.裁取滤纸 按图,裁剪一条长18厘米、宽2厘米的定性滤纸,在纸条下端1.5厘米处,剪去两侧,留下中间长为1.5厘米,宽为1厘米的小方块。

3.点提取液 把剪好的滤纸条搁在两支铅笔上,使凸口处不要接触桌面,用毛细吸管吸取少量叶绿素提取液,在纸条中间小方块的上方点上一个小点,待提取液干燥后,在原处再点一滴,这样连续点上4~5次。

4.层析 取一支带塞的大试管,在软木塞下端钉上用大头针做成的小钩。量取4毫升层析液(层析液的配制方法是,20份60°~90°的石油醚,2份丙酮跟1份苯混和),小心地注入大试管,(切勿让层析液沾污管壁)。把定性滤纸条挂在小钩上,在试管外调整挂钩的长度,不能使提取液的小点浸入层析液。然后把滤纸条慢慢伸入试管,使下端小方块浸入层析液(见图)。几分钟以后,滤纸条上就会出现层析现象,观察叶绿素层析的位置以及它们的颜色。

注意事项

1.裁取定性滤纸条时,尽量注意双手不捏纸面,以免手上有油脂或其他物质污染滤纸。

2.向大试管中注入层析液时,不能污染管壁。叶绿素提取液小点必须在层析液上面。

3.制得的叶绿素提取液,应该盖紧盖子避光,以免接触空气,破坏色素,影响实验效果

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