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根瘤菌的培养和观察

2019-06-29 15:59:45 养殖种植技术书籍

根瘤菌的培养和观察

目的 认识根瘤菌的形态特征,了解培养根瘤菌的方法。

实验前的思考 许多豆科植物能肥田的事实早为人知,公元6世纪北魏贾思勰在《齐民要术》里就已提到。以后,人们一直渴求认识它的真面目。十七世纪,意大利科学家马尔比基曾仔细描绘过根瘤的形状。直至1888年才有人从豆的根瘤里分离出根瘤菌,并培养成功。这才证实了它的存在。

材料器具 蚕豆或豌豆的根;显微镜,载玻片,盖玻片,解剖针,吸水纸,三角烧瓶,酒精灯,火柴,三脚架,石棉网,漏斗架,玻璃漏斗,滤纸,玻璃棒,铝锅,棉絮,量杯,天平,刀片,温度计,烧杯,三角玻璃垫;蔗糖,食盐,白垩粉,3%甲醛溶液(福尔马林液),亚甲基蓝溶液。

步骤

1.制备培养基 取5克蚕豆放在烧杯里,倒入50毫升水,煮沸约半小时,过滤。在滤液中补足水分到50毫升,再加15克蔗糖、0.5克食盐和微量白垩粉。把培养基倒入100毫升的三角烧瓶里,用间歇消毒法消毒(具体方法参见本书第154页)。

2.采取根瘤 取蚕豆的根,洗干净根上的泥土。选择光洁饱满的根瘤(图示),用刀片连同附着的一段根切下来,注意不要伤及根瘤的表皮。

3.消毒灭菌 把切下的没有损伤皮的根瘤,在3%甲醛溶液里消毒15分钟。

4.接种 刀和镊子须先在火焰上灭菌。在无菌接种室里(如无此设备,可在强烈的火焰旁操作),用灭过菌的刀剖开根瘤,切去四周表皮,这时只剩下约绿豆大小的一个根瘤。取出灭了菌盛有培养基的烧瓶一个,拔去棉塞,用灭了菌的镊子箝取一小块根瘤移植到培养基里。塞上棉絮放在黑暗温暖的地方。以后根瘤菌就能在培养基上繁殖。

5.观察根瘤菌 用解剖针从新鲜的根瘤里挑取一部分组织,放在载玻片上,用解剖刀挤压根瘤的组织,在榨出的汁液上加一滴水,拌匀。作成涂片,晾干。在酒精灯火焰上来回烘烤,固定材料,加热程度以载玻片不致灼手为宜,然后用亚甲基蓝溶液染色二三分钟。

结果,在视野里能看到短杆状和Y形的菌状体,这便是根瘤细菌。它的外围因为有细胞壁,染色较深。视野里还有豆科植物根瘤里的组织碎屑,形状很不规则,可以跟根瘤菌区分开来。

分析和讨论 在年幼的根瘤里,根瘤菌极大多数呈短杆状。从长成的根瘤里获得的根瘤菌有不同的形状,多数是椭圆和叉状,也有呈纸牌上的梅花状的。在豆科植物衰老时期的根瘤里,很难再找到根瘤菌。

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