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增加动物骨髓细胞有丝分裂的诱导

2019-06-29 15:58:52 养殖种植技术书籍

增加动物骨髓细胞有丝分裂的诱导

目的 学会用酵母液刺激增加有丝分裂指数的实验操作技术,理解这个原理。

实验前的思考 由于实验动物衰老或处于细胞分裂不活跃时期的原因,有时利用骨髓细胞不一定能获得足够数量的有丝分裂中期相。酵母液能刺激动物骨髓细胞分裂,而且不会引起染色体断裂或损伤,所以广泛用于各种动物骨髓细胞染色体分裂相的诱导。

材料器具 蟾蜍,小白鼠,大白鼠等;显微镜,托盘天平,蜡盘,手摇离心机,培养皿,离心管,吸管,注射器,针头,剪刀,镊子,卫生纸;0.1%秋水仙素溶液,0.075摩尔/升氯化钾溶液,3∶1甲醇乙酸,吉姆萨(Giemsa)染液,10%酵母液。

步骤

1.按蟾蜍体重每25克皮下注射0.3毫升10%酵母液(见图)。

2.24小时后按体重每克注射4微克计算注射量,在蟾蜍的腹腔注射秋水仙素。

3.1小时后毁脊髓处死蟾蜍,迅速取出两侧股骨和胫骨。剔净附在骨面上的肌肉碎渣,剪去两端软骨头使骨髓暴露。用5号针头插入骨头端部,盛有0.075摩尔/升氯化钾溶液的注射器注射压出的注射液将骨髓细胞冲入离心管。反复冲洗几次,以增加细胞数量。

4.把获得的上述骨髓细胞悬液用滴管冲吸几次,混和成均匀细胞悬液后,在室温15~25℃下静置20~30分钟低渗处理。

5.离心机以(800转/分)运转8分钟,用滴管小心吸弃上清液,保留下层骨髓细胞,再沿管壁加入新鲜配制的甲醇乙酸(3∶1)固定液5毫升,用滴管吸打均匀,静置15分钟。

6.重复上述步骤5,换新鲜固定液再固定15分钟。

7.离心机再以(800转/分)运转8分钟,吸弃上清液留下0.5毫升下层细胞液,用滴管吸打均匀。吸取少量细胞液在干净的冷载玻片上滴1~2滴,轻轻吹气通风使细胞均匀分散,固定液快速蒸发干涸。

8.滴上1~2滴吉姆萨染液,染色20分钟后,用水轻轻冲去染液,自然晾干后镜检。

注意事项 干酵母粉的质量跟诱导效果关系很大,不同厂家的产品应该预先试验选用。

分析和讨论

1.本方法也适用于小白鼠、大白鼠等。

2.酵母液注射量可在每25克体重0.1~0.5毫升调整,过少效果不明显,过多诱导率也会下降。

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